Especies animales

Muchos organismos de reglamentación exigen que se utilicen al menos dos especies, una de roedores y otra de no roedores.

Sexo

Normalmente, se utilizará el mismo número de animales machos y hembras.

Número de animales

En el caso de los roedores, cada grupo constará de al menos diez machos y diez hembras; en el de los otros animales, de al menos tres machos y tres hembras.

Cuando se programen exámenes intermedios, el número de animales se aumentará en consecuencia.

Vía de administración

Normalmente se utilizará la vía de administración clínica prevista.

Periodo de administración

El periodo de administración de la sustancia de prueba dependerá del periodo previsto de utilización clínica. El periodo de administración del estudio de toxicidad puede variar de país a país, según su reglamentación particular.

El siguiente cuadro refleja los diversos periodos de administración:

Por lo general, se administrará la sustancia de prueba siete días a la semana. En cada resultado se deben registrar los periodos de administración para el estudio de toxicidad.

Dosis

Se deben utilizar grupos que reciban al menos tres dosis diferentes.

Una de las dosis no debe causar cambios tóxicos (dosis sin efecto) y se debe incluir una dosis que produzca efectos tóxicos manifiestos. En este intervalo, la adición de al menos una dosis intermedia puede aumentar la posibilidad de observar una relación dosis-respuesta en las manifestaciones tóxicas. En todos los estudios se incluirá un grupo testigo vehículo de animales de prueba.

Observaciones y exámenes

Se harán observaciones y exámenes de los siguientes elementos (de 1 a 6):

1. Signos generales, peso corporal e ingesta de alimento y agua

En todos los animales de experimentación se observarán diariamente los signos generales y se medirá periódicamente el peso corporal y la ingesta de alimento. En caso de que sea útil, se determinará también la ingesta de agua. La frecuencia de las mediciones será, normalmente, la siguiente:

Peso corporal: antes de iniciar la administración del medicamento, al menos una vez a la semana durante los tres primeros meses de administración y al menos una vez cada cuatro semanas posteriormente.

Ingesta de alimento: antes de iniciar la administración del medicamento, al menos una vez a la semana durante los tres primeros meses de administración y al menos una vez cada cuatro semanas posteriormente. Si se administra la sustancia de la prueba mezclada con el alimento, se medirá la ingesta una vez a la semana.

2. Análisis hematológico

En el caso de los roedores, se tomarán muestras de sangre antes de la autopsia; en el de los otros animales, antes de iniciar la administración de medicamentos, al menos una vez durante el periodo de administración (en el caso de estudios que duren más de un mes) y antes de la autopsia.

Tanto en los análisis hematológicos como en los bioquímicos, es conveniente incluir el mayor número posible de parámetros.

3. Pruebas de las funciones renal y hepática

Como el hígado y los riñones son los órganos habituales del metabolismo y la excreción, los agentes potencialmente tóxicos les afectan fácilmente; se vigilarán sus funciones en los estudios de toxicidad a largo plazo.

En el caso de los roedores, se seleccionará un número fijo de animales de cada grupo y se efectuará un análisis de orina antes de iniciar la administración del medicamento y al menos una vez durante el periodo de administración.

4. Pruebas de otras funciones

Si procede, se efectuarán pruebas visuales y auditivas y un encefalograma. En el caso de los roedores, se procederá a un examen oftalmológico de un número determinado de animales de cada uno de los grupos al menos una vez durante el periodo de administración; en los no roedores, todos los animales serán examinados antes de iniciar la administración del medicamento y al menos una vez durante el periodo de administración.

5. Se procederá lo antes posible a la autopsia de los animales cuya muerte se descubra en el examen. Se hará un examen macroscópico de órganos y tejidos. Además, cuando sea posible, se harán mediciones del peso de los órganos y exámenes histopatológicos para intentar descubrir la causa de la muerte y la naturaleza (gravedad o grado) de los cambios toxicológicos habidos.

6. Para obtener la mayor cantidad posible de información útil durante el periodo de administración, se sacrificarán todos los animales moribundos en lugar de dejarlos morir. Previamente se registrarán las observaciones clínicas y recogerán muestras de sangre para los análisis hematológico y bioquímico de la sangre. Al hacer la autopsia, se registrarán los datos del examen macroscópico de los órganos y los tejidos, se anotará el peso de los órganos y se hará un examen histopatológico completo para intentar caracterizar la naturaleza (gravedad o grado) de todos los cambios tóxicos.

Se practicará la autopsia de todos los supervivientes al final del periodo de administración o del periodo de recuperación después de tomar muestras de sangre para los análisis hematológico y bioquímico de la sangre; se efectuarán exámenes macroscópicos de los órganos y los tejidos y se medirá el peso de los órganos. Si se descubren cambios en el examen macroscópico de sus órganos y tejidos o si el grupo que recibió la dosis superior revela cambios importantes, se realizarán exámenes histopatológicos de los órganos y los tejidos de los animales que reciban dosis inferiores. Por otra parte, el examen histopatológico de todos los roedores aumentará aún más las posibilidades de descubrir toxicidad.

Recuperación tras los efectos tóxicos

Para investigar la recuperación respecto de los cambios tóxicos, se examinarán los animales a los que se permita vivir durante diferentes lapsos después del fin del periodo de administración de la sustancia de prueba.