Cytométrie en flux

FACSCount^TM

Kit de comptage manuel de cellules CD4+ Coulter

Zymmune

Capcellia

Dynabeads^R

Phosphatase immuno-alcaline

Fabricant

Becton Dickinson Coulter Corp. Ortho Diagnostic Syst.

Becton Dickinson

Coulter Corp.

Zynaxis Inc.

Sanofi Diagnostics Pasteur

Dynal A/S

Réactifs disponibles dans le commerce.

Instrument

Cytomètre en flux et analyse assistée par ordinateur
La préparation peut être automatisée.
Peut nécessiter un compteur de cellules.

Instrument spécial automatisé.

Microscope automatisé ou optique et hémocytomètre.

Microtiter EIA.

Microtiter EIA.

Aimant et matériel de comptage^* alt. microscope optique ou fluorescent.

Microscope optique.

Système de dépistage

MAB fluorescent contre les molécules à la surface des cellules.

MAB fluorescent anti-CD3, CD4 et CD8.

MAB anti-CD4 conjugué à des perles.

MAB anti-CD4 et CD8.

MAB anti-CD4 et CD8.

Anti-CD4 et CD8 conjugués avec perles.

Coloration de frottis sanguins avec MAB anti- CD3, CD4 et CD8.

Spécimen

Sang complet avec lyse RBC.

Sang complet.

Sang complet.

Sang complet.

PBMC.

Sang complet.

Frottis sanguin.

Résultats

Colorations doubles, triples ou quadruples de tout marqueur de surface de cellule où des MAB sont disponibles.

Comptes de CD3, CD4 et CD8.

Comptes de CD4.

Comptes de CD4 et CD8.

pmol CD4/L et CD8/L.

Comptes de CD4 et CD8.

Comptes de CD3, CD4 et CD8 (ou tout MAB intéressant).

Corrélation avec la cytométrie en flux (coeff. de corr.)

S/O

0,93-0,98
(plusieurs études internationales).

0,74-0,91
(plusieurs études internationales).

0,92-0,94
(deux études aux USA).

S/O

0,94
(une étude).

0,96
(une étude).

Coût
(instruments, $US)

40-80 000

25 000

2000

15 000
(matériel standard pour EIA)

15 000
(matériel standard pour EIA).

2000-10 000

2000

Coût/test (réactifs seulement; $US, approx.)

10-15

20

8

28

5

3

Avantages

Puissant et souple, permet des colorations doubles, triples ou quadruples.
Peut être utilisé pour les examens de spécimens difficiles quand les autres techniques sont souvent insuffisantes.

Peu d’étapes, moins d’erreur humaine.
Faible risque de danger biologique.
Résultats rapides.
Donne les comptes de CD3, CD4 et CD8.

Simple et rapide.

Simple.
Peut traiter de nombreux spécimens en même temps. Donne les comptes de CD4 et CD8.

Donne les comptes de CD4 et CD8.

Donne les comptes de CD4 et CD8.
Simple et rapide.
Souple, petit volume de spécimen.
Robuste.

Faible coût
Longue durée de conservation des spécimens.
Petit volume d’échantillons.

Inconvénients

Matériel et réactifs onéreux Complexe.
Exige un personnel hautement formé.

Matériel et réactifs onéreux Le poste de travail ne permet que 8 échantillons à la fois.

Courte durée de conservation. Ne donne que les comptes de CD4.

Nombreuses étapes de pipetage.

Isolation de PBMC par centrifugation de densité. Ne donne pas les résultats sous forme de nombre de cellules, c’est-à-dire qu’il est difficile de comparer avec, par exemple, la cytométrie en flux.
Onéreux

Peu d’échantillons traités à la fois.
Subjectivité du comptage visuel
Courte durée de conservation des spécimens
Non disponible sous forme de kit

Processus de coloration assez compliqué.
Comptage manuel laborieux.
Non disponible sous forme de kit.